• 高洪波战术用人受球迷质疑 高层盼阵痛期早结束 不要轻易放弃。学习成长的路上,我们长路漫漫,只因学无止境。


      目的 �^察金芪枳术汤对糖尿病胃轻瘫(DGP)GK大鼠胃能源的影响,讨论其作用机制。方式 80只雄性GK大鼠随机拔取12只作为正常组,其他68只给以高糖高脂饲料不规则喂养8周制备DGP模子,成模大鼠随机分为模子组、阴性药组和金芪枳术汤低、中、高剂量组,干涉干与12周,测定胃内色素残留率,ELISA检测血浆多巴胺(DA)、乙酰胆碱(ACh)、5-羟色胺(5-HT)含量,HE染色视察胃窦结构病理转变,透射电镜视察胃窦结构黏膜层超微结构,Western blot检测胃窦结构RhoA、ROCK1、ROCK2卵白表白。了局 与正常组比拟,模子组胃内色素残留率升高,DA、ACh、5-HT含量下降,RhoA、ROCK1、ROCK2卵白表白下降(P0.05);与金芪枳术汤低剂量组比拟,金芪枳术汤高剂量组胃内色素残留率较着下降,DA、ACh、5-HT含量较着升高,RhoA、ROCK1、ROCK2卵白表白较着升高(P0.05). Compared with JQZZD low-dose group, the residual rate of pigment in JQZZD high-dose group decreased, while DA, ACh and 5-HT, relative amount of protein expressions of RhoA, ROCK1 and ROCK2 increased (P   Keywords: diabetic gastroparesis; Jinqi Zhizhu Decoction; dopamine; ACh; 5-HT; RhoA/ROCK signaling pathway   糖尿病胃轻瘫(diabetic gastroparesis,DGP)是糖尿病(diabetes mellitus,DM)消化道慢性并发症之一,其病发率高。DGP的病发机制庞杂,与胃神经病变、胃平滑肌细胞受损等要素无关,其次要病理特性和中心环节是平滑肌细胞受损,RhoA/ROCK旌旗灯号通路是平滑肌膨胀调治的首要机制,RhoA是Ras同源物基因组成员之一,RhoA活化后惹起一系列上游效应器激活,增进平滑肌膨胀。多巴胺(DA)、乙酰胆碱(ACh)和5-羟色胺(5-HT)等神经递质对于胃肠道平滑肌的膨胀均有较着的镇静作用。本实行以DGP大鼠为研讨对象,视察金芪枳术汤对DGP大鼠胃内色素残留率,DA、ACh和5-HT等神经递质活性,胃窦黏膜细胞超微结构及胃窦结构RhoA/ROCK旌旗灯号通路相干因子RhoA、ROCK1、ROCK2卵白表白的影响,讨论其增进胃能源的作用机制。   1 实行资料   1.1 植物   SPF级GK大鼠80只,雄性,9周龄,体质量(180±20)g,上海斯莱克实行植物有限责任公司,植物合格证号SCXK(沪)2012-0002。饲养于甘肃西医药大学SPF级实行植物中心。   1.2 药物   金芪枳术汤(鸡内金、红芪、枳壳、白术、黄连、法半夏等),饮片均购于兰州惠仁堂大药房,按传统中药煎煮方式浸泡、煎煮、过滤,恒温水浴稀释为5.54 g原药材/mL药液;枸橼酸莫沙必利片,成都康弘药业集团股份有限公司,批号170216。   1.3 次要试剂与仪器   DA、ACh、5-HT ELISA�剂盒,江苏菲亚生物科技有限公司;抗RhoA一抗,美国Abcam公司;抗ROCK1一抗,美国Genetex公司,抗ROCK2一抗,美国Genetex公司。酶标仪(芬兰Labsystems Multiskan MS,352型),透射电镜(日本Olympus公司),光学显微镜(日本Olympus公司)。   2 实行方式   2.1 造模和分组   GK大鼠随机拔取12只作为正常组,其他68只参照文献[1-3]方式给以高糖高脂饲料不规则喂养8周,随机血糖>16.7 妹妹ol/L,腹部胀大、体质量加重,随机抽查胃排空率下降,提醒模子复制胜利。60只成模大鼠随机分为模子组、阴性药组和金芪枳术汤低、中、高剂量组,每组12只。阴性药组予莫沙必利药液0.7 mg/(200 g・d)灌胃,金芪枳术汤低、中、高剂量组别离予金芪枳术汤1.38、2.77、5.54 g/(200 g・d)灌胃,正常组和模子组予等量生理盐水灌胃。给药体积1 mL/(200 g・d),连续12周。   2.2 取材   干涉干与第12周末,大鼠禁食不由水24 h,1 mg/mL美蓝溶液0.4 mL灌胃,30 min后正法大鼠,取全胃,生理盐水冲刷胃残留物并收集冲刷液,离心,取上清液,测定胃内色素残留率。股动脉取血,保留部分血浆,离散血清,置于-20 ℃冰箱保留。取胃窦一部分结构,多聚甲醛固定,用于光镜下病理视察。取胃窦部5 妹妹×5 妹妹×2 妹妹大小的结构块,戊二醛固定液固定,透射电镜视察胃窦结构黏膜层超微结构。一部分胃窦结构液氮冷冻保留,用于检测胃窦平滑肌RhoA/ROCK旌旗灯号通路相干旌旗灯号因子卵白表白。   2.3 视察目标   2.3.1 胃内色素残留率   大鼠正法后开腹取全胃,沿胃大弯剪开,胃内残留物用6 mL生理盐水冲刷并收集冲刷液。3500 r/min离心15 min,取上清液,于波长620 nm处检测吸光度(OD)。另取一试管,同一浓度色素0.4 mL,相反条件下离心,测OD,作为尺度管。胃内色素残留率(%)=测定管OD值÷尺度管OD值×100%。   2.3.2 神经递质含量检测   酶标仪检测大鼠血浆DA、ACh、5-HT的含量,按ELISA试剂盒阐明 顺叙书举行驾御。   2.3.3 病理视察   胃窦结构4%多聚甲醛固定24 h,梯度乙醇脱水,二甲苯通明,浸蜡,白腊包埋,惯例病理切片,HE染色,光学显微镜视察。   2.3.4 胃窦结构黏膜层超微结构视察   取胃窦5 妹妹×5 妹妹×2 妹妹,戊二醛固定液固定,蔗糖磷酸缓冲液洗濯2次,四氧化锇固定2 h,丙酮梯度脱水,环氧树脂包埋,超薄切片,醋酸铀-柠檬酸铅两重电子染色,透射电镜下视察,摄影。   2.3.5 Western blot检测胃窦结构RhoA、ROCK1、ROCK2的卵白表白   取胃窦结构50 mg,提取卵白质,按照试剂盒驾御阐明 顺叙举行电泳、转膜、封闭,别离插手抗RhoA、ROCK1、ROCK2一抗和内参β-actin(浓度1∶1000)种植留宿。凝胶成像显影摄影,图像剖析软件举行剖析,各组整合灰度值与内参β-actin比拟,计算RhoA、ROCK1、ROCK2的绝对表白量。   3 统计学方式   采纳SPSS22.0统计软件举行剖析。实行数据以―x±s默示,多样本均数间比拟采纳方差剖析,组间多重比拟采纳t检讨。检讨水准α=0.05。   4 了局   4.1 大鼠普通情况   正常组大鼠饮食正常,养分情况优秀,毛色有光线,反映敏捷,体质量渐增;模子组大鼠多饮、多食、多尿较着,肉体萎靡,毛色无光线。模子组大鼠殒命2只,金芪枳术汤低、中、高剂量组大鼠各殒命3、2、1只。干涉干与12周后,各给药组大鼠普通情况较模子组较着改良。   4.2 金芪枳术汤对模子大鼠胃内色素残留率的影响   与正常组比拟,模子组大鼠胃内色素残留率较着升高,差异有统计学意思(P0.05);金芪枳术汤低剂量组大鼠胃内色素残留率高于金芪枳术汤高剂量组(P0.05)。了局见表3、图3。   5 讨论   金芪枳术汤为甘肃省名西医吴红彦教学临床医治糖尿病胃能源缺乏 不置可否经验方,由枳术丸合小陷胸汤化裁而来,方中含鸡内金、红芪、枳壳、白术、黄连、法半夏、丹参等药,全方共奏健脾益气、消食和胃、除痞止呕、行气化瘀、清热生津的成效。枳术丸、小陷胸汤加减医治DM及其并发症疗效切当[4-5]。鸡内金消食导滞兼化瘀滞,红芪为甘肃道地药材,益气健脾升阳,鸡内金和红芪次要成分均有较好降血糖作用。RhoA/ROCK旌旗灯号通路在体内遍及存在,介导DM多种并发症的产生[6],DGP的产生与RhoA/ROCK旌旗灯号通路被按捺无关[7-8],ROCK活化后能增强平滑肌的膨胀力[9]。ACh是胃肠道最次要的一种镇静性神经递质,可以 呐喊镇静胃肠道平滑肌,使其膨胀幅度、张力、爬动添加。DA、5-HT是单胺类神经递质,DA参与对胃肠能源的调治作用,5-HT有镇静哺乳植物胃肠活动的作用。本研讨发觉,DGP模子大鼠胃窦结构RhoA、ROCK1和ROCK2卵白表白较正常组较着淘汰,提醒RhoA/ROCK旌旗灯号转导途径表白下调、活性被按捺与DGP胃能源缺乏 不置可否有必然相干性。干涉干与12周后,阴性药组和金芪枳术汤高剂量组RhoA、ROCK1和ROCK2卵白表白添加,表白金芪枳术汤能提高RhoA/ROCK旌旗灯号通路的活性。   本研讨中,模子组胃内色素残留率升高,神经递质排泄淘汰,胃黏膜细胞破碎摧毁较着,干涉干与12周后,阴性药组和金芪枳术汤各剂量组胃内色素残留率较着下降,神经递质排泄较着添加,黏膜毁伤水平失掉较着改良,表白金芪枳术汤可以 呐喊增进胃排空,增进神经递质排泄,在必然水平上修复损坏的胃黏膜。金芪枳术汤庇护胃黏膜和增进胃能源的作用机制可能与增进神经递质排泄、上调RhoA/ROCK旌旗灯号通路无关。      [1] 王飞,郭沛然,韩菲,等.益气养阴化瘀通络中药对糖尿病胃轻瘫大鼠平滑肌细胞凋亡的影响[J].世界华人消化杂志,2014,22(13):1848-1853.   [2] 彭艳,贺凤娥,万全荃,等.电针对糖尿病胃轻瘫大鼠胃窦Ghrelin和GHSR卵白及基因表白的影响[J].中国西医基础医学杂志,2016,22(8):1088-1091.   [3] 段卫娜,张振凌,孔莹莹,等.地黄生熟异用对增液汤下降糖尿病大鼠血糖的影响[J].中华西医药杂志,2014,29(1):266-268.   [4] 李晓玲,张声生,杨成,等.枳术丸对功能性消化不良大鼠胃平滑肌膨胀反映及胃促生长素受体卵白表白的影响[J].中国中西医结合杂志, 2016,36(2):210-215.   [5] 赵晓敏,杜学荣.加味小陷胸汤医治功能性消化不良32例疗效视察[J].时珍国医国药,2007,18(7):1741.   [6] 张默函,蔡英兰,朴丽花,等.糖尿病胃瘫大鼠胃窦平滑肌自噬相干卵白的静态转变及其意思[J].中国糖尿病杂志,2014,22(7):653-655.   [7] 孙晓萌,朱滢,王庆娥,等.RhoA/ROCK旌旗灯号通路在糖尿病结肠肌层中的表白[J].胃肠病学,2014,19(11):673-677.   [8] BHETWAL B P, AN C, BAKER S A, et al. Impaired contractile responses and altered expression and phosphorylation of Ca2+ sensitization proteins in gastric antrum smooth muscles from ob/ob mice[J]. Muscle Res Cell Motil,2013,34(2):137-149.   [9] WANG Y P, MEREDITH B, NADEENE R, et al. ROCK isoform regulation of myosin phosphatase and contractility in vascular smooth muscle cells[J]. Circ Res,2009,104:531-540.   (收稿日期:2017-12-14)   (修回日期:2018-01-25;编纂:华强)

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